Jawaban singkat
Media selektif mengandalkan penghambat (garam empedu, zat warna, antibiotik, garam tinggi, telurit) untuk menahan organisme yang tidak diinginkan dan mengandalkan indikator untuk membuat target terlihat. Kegagalan datang dalam dua bentuk. "Organisme yang salah tumbuh" biasanya berarti penghambat telah kehilangan kekuatannya: sterilisasi berlebihan, cawan disimpan terlalu lama, atau suplemen pasca-sterilisasi yang tidak pernah ditambahkan. "Organisme yang benar tidak tumbuh" biasanya berarti penghambatan terlalu kuat atau nutrisi terlalu lemah: suplemen berlebih dosis, cawan terlalu kering, atau sel target yang sudah cedera sejak awal. Dalam kedua kasus, uji paralel dengan galur acuan menentukan dalam satu hari apakah media atau sampel yang bersalah.
Organisme yang salah tumbuh: penghambat telah gagal
- Sterilisasi berlebihan. Garam empedu, kristal violet, hijau brilian, dan merah netral peka terhadap panas; 121 °C selama 15 menit adalah maksimum, dan autoklaf ulang atau pemanasan lama pada botol besar melemahkannya. Media yang petunjuknya menyatakan "didihkan untuk melarutkan, jangan diautoklaf" (m-Endo, beberapa media kromogenik) tidak boleh sama sekali masuk autoklaf.
- Suplemen tidak ada atau keliru. Baird-Parker membutuhkan telurit kuning telur, MYP membutuhkan polimiksin, Oxford membutuhkan suplemen antibiotiknya. Media basal saja tidak memiliki selektivitas; tinggalkan suplemennya dan semuanya tumbuh.
- Disimpan terlalu lama setelah penyiapan. Cawan yang mengandung zat warna dan antibiotik kehilangan daya hambat setelah satu sampai dua minggu dalam lemari pendingin; begitu suplemen antibiotik ditambahkan, masa simpannya lebih pendek lagi. Ikuti petunjuknya.
- pH menyimpang. Pada pH rendah, garam empedu dalam MacConkey menghambat lebih lemah; jika pH turun terlalu jauh setelah sterilisasi, tinjau kembali penyiapannya.
- Inokulum terlalu berat. Dengan beban yang sangat tinggi, penghambat hanya mengurangi, bukan menghilangkan; flora latar tetap lolos. Encerkan sebelum ditanam.
Organisme yang benar tidak tumbuh: penghambatan terlalu kuat atau nutrisi terlalu sedikit
- Suplemen berlebih dosis. Gandakan antibiotik atau telurit dan target pun ikut tertekan. Takar dengan pengukuran, bukan "sekitar beberapa tetes".
- Cawan terlalu kering atau terlalu tua. Sel target yang cedera tidak dapat tumbuh pada permukaan yang terdehidrasi, yang memberi kesempatan bagi flora latar.
- Sel target cedera. Sampel yang telah dipanaskan, dibekukan, atau diasamkan mengandung sel yang harus pulih dahulu dalam media non-selektif atau kaldu pengayaan; ditanam langsung pada media selektif, sel-sel itu dibunuh oleh penghambat. Inilah sebabnya metode uji menyertakan pra-pengayaan.
- Kondisi inkubasi. Suhu, waktu, atau atmosfer yang keliru (vibrio dan kampilobakter masing-masing memiliki persyaratannya) dan target tidak tumbuh tanpa ada kesalahan pada media.
Memutuskan dengan galur acuan
Setiap media selektif memiliki galur uji kinerja yang ditetapkan: target yang harus tumbuh dengan reaksi yang benar dan non-target yang harus terhambat. Misalnya:
| Media | Harus tumbuh | Harus terhambat |
|---|---|---|
| MacConkey Agar | E. coli (merah), Salmonella (tidak berwarna) | S. aureus, Enterococcus |
| Baird-Parker | S. aureus (hitam dengan halo jernih) | E. coli, Bacillus |
| XLD | Salmonella (merah dengan pusat hitam) | E. coli (kuning), S. aureus |
| TCBS | Vibrio parahaemolyticus (hijau), V. cholerae (kuning) | E. coli |
| Cetrimide | Pseudomonas aeruginosa (berfluoresensi) | E. coli, S. aureus |
Metode: inokulasi media yang baru disiapkan dan media yang dicurigai dengan galur target maupun non-target, diinkubasi bersamaan dengan sampel. Jika non-target tumbuh pada cawan yang dicurigai, media telah gagal; jika galur acuan berperilaku normal dan hanya sampel yang aneh, masalahnya pada sampel. ISO 11133 menguraikan uji ini secara lengkap, dan sistem mutu laboratorium biasanya mewajibkannya untuk setiap lot media.
Kapan membuat ulang
- Uji galur acuan gagal: buang batch tersebut, buat ulang, dan temukan penyebabnya (catatan sterilisasi, lot dan dosis suplemen, air).
- Cawan melewati batas penyimpanan, permukaan retak atau terdehidrasi, warna tidak biasa: jangan gunakan.
- Serbuk menggumpal atau berubah warna setelah dibuka: lihat Masih bisakah media kering yang menggumpal atau berubah warna digunakan.
FAQ
Apa perbedaan antara media basal dan media lengkap? "Basal" (base) masih membutuhkan suplemen (kuning telur, darah, antibiotik, telurit) yang ditambahkan setelah sterilisasi karena komponen-komponen itu tidak tahan panas. Produk apa pun dengan kata "Base" pada namanya termasuk jenis ini, dan petunjuknya menyatakan apa yang ditambahkan, berapa banyak, dan pada suhu berapa.
Warna pada media kromogenik saya pudar. Apakah medianya yang bersalah? Periksa dulu waktu inkubasi (sebagian besar reaksi warna membutuhkan 24 jam penuh) dan apakah cawan disimpan dalam gelap (substrat kromogenik terurai oleh cahaya). Jika keduanya baik, uji dengan galur acuan.
Bisakah saya menambahkan antibiotik sendiri untuk membuat media selektif? Bisa, tetapi jenis, konsentrasi, dan suhu penambahannya harus mengikuti metode, dan masa simpan setelahnya pendek. Jika metode menetapkan suplemen, suplemen komersial lebih konsisten.
Apakah media selektif STBIO disertai data kinerja? Setiap lot dikirim dengan COA yang mencakup respons kultur terhadap galur acuan; laporan uji kinerja lengkap tersedia atas permintaan. Setiap halaman produk juga menyatakan metode resmi mana yang menjadi tempat media tersebut dan pada tahap yang mana; lihat cari media berdasarkan metode standar.