Apa itu media LB?
LB adalah singkatan dari Luria-Bertani, atau Lysogeny Broth, dan merupakan media yang paling luas digunakan untuk menumbuhkan E. coli dalam biologi molekuler. Media ini hanya memiliki tiga bahan: tripton sebagai sumber asam amino dan peptida, ekstrak ragi (yeast extract) sebagai sumber vitamin dan faktor pertumbuhan, serta natrium klorida untuk keseimbangan osmotik. Ketiga versi standarnya hanya berbeda pada jumlah garam.
Formulasi LB broth (per liter)
| Bahan | LB Miller | LB Lennox | LB Luria |
|---|---|---|---|
| Tripton | 10 g | 10 g | 10 g |
| Ekstrak ragi | 5 g | 5 g | 5 g |
| NaCl | 10 g | 5 g | 0,5 g |
| Total (media kering) | 25 g/L | 20 g/L | 15,5 g/L |
| pH setelah sterilisasi (25 °C) | 7,0 ± 0,2 | 7,0 ± 0,2 | 7,0 ± 0,2 |
- Miller: versi serbaguna dengan garam terbanyak, digunakan untuk kultur rutin E. coli dan preparasi plasmid.
- Lennox: garam setengahnya, dipilih saat bekerja dengan antibiotik yang peka terhadap garam seperti blastisidin atau zeosin.
- Luria: hampir tanpa garam, untuk aplikasi khusus.
Untuk LB Agar, tambahkan 15 g/L agar ke salah satu dari ketiga formulasi tersebut.
Cara menyiapkan LB broth
- Timbang 25 g LB Miller kering, atau 10 g tripton, 5 g ekstrak ragi, dan 10 g NaCl.
- Tambahkan sekitar 900 mL air deionisasi dan aduk hingga larut. LB larut tanpa pemanasan.
- Tepatkan volume hingga 1 L. Tidak perlu penyesuaian pH; formulasi yang benar akan berada di sekitar 7,0 setelah sterilisasi. Jika terpaksa menyesuaikan, gunakan NaOH 1 N hingga 7,0 sampai 7,5.
- Bagikan ke dalam botol, isi tidak lebih dari dua pertiga, dengan tutup dilonggarkan.
- Autoklaf pada 121 °C selama 15 menit.
- Dinginkan hingga suhu ruang sebelum digunakan. Simpan pada 4 °C di tempat gelap dan gunakan dalam waktu dua minggu.
Cara menyiapkan LB agar
- Tambahkan 25 g LB kering ditambah 15 g agar (atau 40 g serbuk LB Agar siap pakai) ke dalam 1 L air deionisasi.
- Panaskan hingga mendidih sambil diaduk sampai agar larut sempurna; jika tidak, cawan akan tidak merata.
- Autoklaf pada 121 °C selama 15 menit.
- Dinginkan hingga 50 sampai 55 °C (botol dapat dipegang dengan tangan) sebelum menambahkan antibiotik; suhu yang lebih tinggi akan menonaktifkannya.
- Tuang 20 sampai 25 mL per cawan, biarkan tutup sedikit terbuka hingga memadat, lalu simpan dalam posisi terbalik pada 4 °C.
Kapan menambahkan antibiotik
Selalu setelah sterilisasi, begitu media berada di bawah 55 °C. Jangan pernah mengautoklaf antibiotik bersama media. Konsentrasi kerja yang umum: ampisilin 100 µg/mL, kanamisin 50 µg/mL, kloramfenikol 25 µg/mL, tetrasiklin 10 µg/mL (lindungi dari cahaya).
Pertanyaan yang sering diajukan
Media menjadi gelap atau membentuk endapan setelah diautoklaf. Biasanya karena sterilisasi berlebih, yang memicu reaksi Maillard antara gula dan asam amino, atau karena air sadah. Persingkat siklus dan gunakan air deionisasi. Lihat artikel tentang media yang menjadi gelap atau keruh setelah diautoklaf.
Agar tidak memadat. Agar tidak larut sempurna, atau pH terlalu rendah. Didihkan hingga larutan jernih sebelum dituang. Lihat artikel tentang agar yang tidak memadat.
Pertumbuhan lambat. Pastikan dahulu apakah Anda menggunakan Miller atau Lennox, lalu periksa triptonnya. Tripton dari sumber yang berbeda memiliki profil asam amino yang berbeda; bandingkan kurva pertumbuhan saat berganti pemasok. Lihat LB Broth Miller vs Lennox.
Apakah LB dapat digunakan untuk ragi? Ragi akan tumbuh, tetapi YPD adalah pilihan yang lebih baik. LB dirancang untuk bakteri, sedangkan ragi membutuhkan lebih banyak glukosa.
Membeli media kering atau menimbang sendiri?
Menimbang ketiga bahan adalah cara termurah, tetapi setiap penimbangan menambah galat dan batch menjadi tidak konsisten. Media kultur kering (dehydrated culture media) sudah dicampur terlebih dahulu; cukup tambahkan air dan media siap digunakan, sehingga cocok untuk pemakaian rutin dan laboratorium bersama. STBIO MEDIA menyediakan LB Broth Miller, LB Broth Lennox, LB Agar, serta tripton dan ekstrak ragi untuk membuatnya sendiri. Spesifikasi dan ukuran kemasan tersedia di setiap halaman produk.