Bagaimana cara menyiapkan dan mensterilkan media kultur kering?

Langkah dasar

1. Timbang sesuai jumlah per liter yang tercantum pada lembar spesifikasi dan gunakan air murni atau air suling. Media kultur kering menyerap kelembapan, jadi timbang dengan cepat setelah dibuka dan segera tutup kembali wadahnya.
2. Larutkan dengan menambahkan serbuk ke dalam air sebanyak sekitar setengah volume akhir sambil diaduk, lalu tepatkan hingga volume penuh. Sebagian besar media cair (broth) larut pada suhu ruang. Media yang mengandung agar harus dipanaskan sambil diaduk hingga mendidih penuh selama satu menit sampai cairan jernih dan tidak ada partikel yang tersisa pada dinding wadah.
3. Periksa pH bila diperlukan. Sebagian besar formulasi tidak memerlukan penyesuaian. Jika perlu, sesuaikan dengan NaOH 1 N atau HCl 1 N dengan pengukuran pada 25 °C, dan lakukan sebelum sterilisasi karena proses autoklaf sedikit menurunkan pH.
4. Bagikan ke dalam wadah yang diisi tidak lebih dari dua pertiga, dengan tutup dilonggarkan.
5. Sterilisasi, biasanya pada 121 °C selama 15 menit. Formulasi berkadar gula tinggi atau volume besar mungkin memerlukan siklus yang lebih singkat atau suhu yang lebih rendah sebagaimana tercantum pada lembar spesifikasi, untuk menghindari karamelisasi.
6. Tuang ke cawan setelah media mendingin hingga 45 sampai 50 °C. Terlalu panas menghasilkan kondensasi yang berlebihan; terlalu dingin membuat media memadat sebelum dituang.

Kesalahan umum

• Mengautoklaf sebelum agar larut sempurna, sehingga gel tidak merata dan terbentuk endapan di dasar.
• Menuang seluruh isi kemasan sekaligus ke dalam air dengan volume penuh, yang membentuk lapisan kulit di permukaan dengan serbuk kering di bawahnya.
• Sterilisasi terlalu lama, yang menggelapkan media dan menurunkan kinerja (lihat "Apakah normal jika media menggelap atau menjadi keruh setelah autoklaf?").
• Menyiapkan media dengan air keran; kalsium, magnesium, dan klorin memengaruhi beberapa media selektif.

Formulasi yang tidak boleh diautoklaf

Antibiotik, beberapa pewarna, dan suplemen peka panas lainnya ditambahkan secara aseptik setelah sterilisasi, begitu media mendingin hingga sekitar 50 °C. Lembar spesifikasi menandai komponen yang harus "ditambahkan setelah sterilisasi".