LB 배지란?
LB는 Luria-Bertani 또는 Lysogeny Broth의 약자로, 분자생물학에서 대장균 배양에 가장 널리 사용되는 배지입니다. 성분은 세 가지뿐입니다. 아미노산과 펩타이드를 공급하는 트립톤, 비타민과 성장인자를 공급하는 효모 추출물, 그리고 삼투압 균형을 위한 염화나트륨입니다. 세 가지 표준 버전은 염의 양만 다릅니다.
LB Broth 조성(리터당)
| 성분 | LB Miller | LB Lennox | LB Luria |
|---|---|---|---|
| 트립톤 | 10 g | 10 g | 10 g |
| 효모 추출물 | 5 g | 5 g | 5 g |
| NaCl | 10 g | 5 g | 0.5 g |
| 총량(건조 배지) | 25 g/L | 20 g/L | 15.5 g/L |
| 멸균 후 pH(25 °C) | 7.0 ± 0.2 | 7.0 ± 0.2 | 7.0 ± 0.2 |
- Miller: 염이 가장 많은 범용 버전으로, 일상적인 대장균 배양과 플라스미드 제조에 사용합니다.
- Lennox: 염이 절반이며, blasticidin이나 zeocin처럼 염에 민감한 항생제를 사용할 때 선택합니다.
- Luria: 염이 거의 없으며, 특수 용도에 사용합니다.
LB Agar를 만들려면 세 조성 중 어느 것에든 한천 15 g/L를 추가합니다.
LB Broth 조제 방법
- 건조 LB Miller 25 g, 또는 트립톤 10 g, 효모 추출물 5 g, NaCl 10 g을 칭량합니다.
- 탈이온수 약 900 mL를 넣고 녹을 때까지 교반합니다. LB는 가열하지 않아도 녹습니다.
- 1 L로 정용합니다. pH 조정은 필요하지 않으며, 올바른 조성이라면 멸균 후 7.0 부근이 됩니다. 조정이 꼭 필요하다면 1 N NaOH로 7.0~7.5에 맞춥니다.
- 병의 2/3를 넘지 않게 분주하고 뚜껑을 느슨하게 닫습니다.
- 121 °C에서 15분간 고압증기멸균(오토클레이브)합니다.
- 사용 전에 실온까지 식힙니다. 4 °C 차광 보관하고 2주 이내에 사용합니다.
LB Agar 조제 방법
- 건조 LB 25 g과 한천 15 g(또는 LB Agar 완제 분말 40 g)을 탈이온수 1 L에 넣습니다.
- 교반하면서 끓을 때까지 가열하여 한천을 완전히 녹입니다. 그렇지 않으면 플레이트가 고르지 않게 됩니다.
- 121 °C에서 15분간 고압증기멸균(오토클레이브)합니다.
- 항생제를 넣기 전에 50~55 °C(병을 손으로 잡을 수 있는 온도)까지 식힙니다. 온도가 더 높으면 항생제가 불활성화됩니다.
- 플레이트당 20~25 mL를 분주하고, 굳을 때까지 뚜껑을 살짝 열어 둔 뒤 뒤집어서 4 °C에 보관합니다.
항생제 첨가 시점
항상 멸균 후 배지가 55 °C 아래로 식은 다음에 첨가합니다. 항생제를 배지와 함께 고압증기멸균해서는 안 됩니다. 일반적인 사용 농도: ampicillin 100 µg/mL, kanamycin 50 µg/mL, chloramphenicol 25 µg/mL, tetracycline 10 µg/mL(차광).
자주 묻는 질문
고압증기멸균 후 배지가 어두워지거나 침전이 생겼습니다. 대개 과도한 멸균으로 당과 아미노산 사이에 마이야르 반응이 일어났거나, 경수를 사용한 경우입니다. 멸균 시간을 줄이고 탈이온수를 사용하십시오. 고압증기멸균 후 배지가 어두워지거나 탁해지는 현상에 관한 글을 참고하십시오.
한천이 굳지 않았습니다. 한천이 완전히 녹지 않았거나 pH가 너무 낮은 경우입니다. 분주 전에 맑은 용액이 될 때까지 끓이십시오. 한천이 굳지 않는 원인에 관한 글을 참고하십시오.
증식이 느립니다. 먼저 Miller와 Lennox 중 어느 것을 사용하고 있는지 확인한 뒤 트립톤을 살펴보십시오. 원료가 다른 트립톤은 아미노산 프로필이 다르므로, 공급업체를 변경할 때는 증식 곡선을 비교하십시오. LB Broth Miller vs Lennox 글을 참고하십시오.
LB를 효모 배양에 사용할 수 있습니까? 효모도 자라기는 하지만 YPD가 더 적합합니다. LB는 세균용으로 설계되었고, 효모는 더 많은 포도당을 필요로 합니다.
건조 배지를 구매할 것인가, 직접 칭량할 것인가?
세 가지 성분을 직접 칭량하는 것이 가장 저렴하지만, 칭량할 때마다 오차가 생기고 로트 간 편차가 누적됩니다. 건조 배지(분말 배지)는 미리 혼합되어 있어 물만 넣으면 바로 사용할 수 있으므로, 일상적인 사용이나 공용 실험실에 적합합니다. STBIO MEDIA는 LB Broth Miller, LB Broth Lennox, LB Agar와 직접 조제용 트립톤 및 효모 추출물을 공급합니다. 규격과 포장 단위는 각 제품 페이지에 있습니다.