기본 단계
- 칭량. 규격서에 명시된 리터당 사용량을 칭량하고 정제수 또는 증류수를 사용합니다. 건조 배지(분말 배지)는 흡습성이 있으므로 개봉 후 신속히 칭량하고 즉시 용기를 다시 밀봉하십시오.
- 용해. 최종 용량의 약 절반에 해당하는 물에 교반하면서 분말을 넣은 뒤 정량까지 채웁니다. 대부분의 액체배지는 실온에서 용해됩니다. 한천을 함유한 배지는 교반하면서 완전히 끓는 상태까지 가열하여, 액체가 투명해지고 용기 벽에 입자가 남지 않을 때까지 1분간 유지해야 합니다.
- pH 확인(필요한 경우). 대부분의 조성은 조정이 필요 없습니다. 필요하다면 25 °C에서 측정하여 1 N NaOH 또는 1 N HCl로 조정하되, 고압증기멸균(오토클레이브)으로 pH가 약간 낮아지므로 멸균 전에 조정하십시오.
- 분주. 용기의 3분의 2를 넘지 않게 채우고 뚜껑을 느슨하게 닫습니다.
- 멸균. 일반적으로 121 °C에서 15분입니다. 당 함량이 높거나 용량이 큰 조성은 캐러멜화를 피하기 위해 규격서에 명시된 대로 더 짧은 사이클이나 낮은 온도가 필요할 수 있습니다.
- 플레이트 분주. 배지가 45~50 °C로 식으면 분주합니다. 너무 뜨거우면 응축수가 많이 생기고, 너무 차가우면 분주 전에 굳어 버립니다.
흔한 실수
- 한천이 완전히 용해되기 전에 고압증기멸균하여 겔이 고르지 않고 바닥에 침전이 생기는 경우.
- 전체 용량의 물에 포장 전체를 한꺼번에 부어 표면에 막이 생기고 그 아래 마른 분말이 남는 경우.
- 멸균 시간이 지나치게 길어 배지가 어두워지고 성능이 저하되는 경우("고압증기멸균 후 배지가 어두워지거나 탁해지는 이유는 무엇입니까?" 참조).
- 수돗물로 조제하는 경우. 칼슘, 마그네슘, 염소가 일부 선택배지에 영향을 미칩니다.
고압증기멸균하면 안 되는 조성
항생제, 일부 염료 및 기타 열에 민감한 첨가물은 멸균 후 배지가 약 50 °C로 식었을 때 무균적으로 첨가합니다. 규격서에 "멸균 후 첨가" 성분이 표시되어 있습니다.