Jawaban singkat
Endapan putih atau seperti susu hampir selalu merupakan magnesium atau kalsium fosfat: kelarutan fosfat bersama ion magnesium dan kalsium turun pada suhu tinggi dan kristal pun terbentuk. Ini berbeda dari endapan hitam, yaitu besi sulfida yang terbentuk dari hidrogen sulfida yang dilepaskan asam amino belerang dan bereaksi dengan besi; lihat Endapan hitam dalam kaldu fermentasi setelah sterilisasi. Endapan putih tidak toksik dengan sendirinya, tetapi menandakan sebagian fosfor, magnesium, dan kalsium telah keluar dari larutan, yang memengaruhi pertumbuhan pada media terdefinisi dan media fermentasi. Media uji standar yang disiapkan dengan benar seharusnya tidak menunjukkannya; jika ada, periksa airnya terlebih dahulu.
Membedakan endapan
| Tampilan | Paling mungkin | Asal |
|---|---|---|
| Serbuk putih halus, tersuspensi saat dikocok, mengendap saat didiamkan | Magnesium atau kalsium fosfat | Fosfat bertemu magnesium atau kalsium |
| Gumpalan putih menempel pada kaca | Protein terdenaturasi | Pepton terlalu panas atau pH jauh menyimpang |
| Abu-abu sampai hitam | Besi sulfida | Asam amino belerang plus besi |
| Cokelat, seluruh botol lebih gelap | Produk Maillard | Gula dan asam amino terlalu panas |
Uji sederhana: endapan fosfat putih larut saat ditambahkan beberapa tetes asam klorida encer; gumpalan protein tidak.
Formulasi yang rawan
- Fosfat tinggi bersama magnesium dan kalsium: media terdefinisi tipe M9, dan media fermentasi yang menggabungkan dikalium fosfat, magnesium sulfat, dan kalsium klorida.
- Disiapkan dengan air ledeng: kesadahan (kalsium, magnesium) dalam air ledeng bereaksi dengan fosfat dalam formulasi. Ini penyebab paling umum di laboratorium pengujian; serbuk yang sama disiapkan dengan air murni tidak bermasalah.
- pH alkali: fosfat lebih mudah mengendap bersama magnesium dan kalsium di atas pH 7,5.
- Konsentrat: konsentrat 10x yang disterilkan untuk menghemat ruang lebih banyak mengendap karena semuanya sepuluh kali lebih pekat.
Cara menghindarinya
- Siapkan dengan air murni atau air deionisasi. Ini saja sudah menghilangkan sebagian besar kasus di laboratorium.
- Sterilkan terpisah: buat garam magnesium dan kalsium sebagai larutan pekat terpisah, sterilkan, dan tambahkan secara aseptik setelah media mendingin di bawah 50 °C. Biarkan fosfat tetap dalam formulasi utama. Ini praktik standar untuk media fermentasi.
- Tambahkan zat pengkelat: puluhan miligram per liter natrium sitrat atau EDTA menahan magnesium dan kalsium sehingga tidak mengkristal bersama fosfat. Sangat efektif dalam larutan unsur renik.
- Jangan biarkan pH pra-sterilisasi alkali: sesuaikan ke target lalu sterilkan; jangan melebihkan "sedikit lebih tinggi untuk mengantisipasi penurunan".
- Jangan terlalu pekat: formulasi yang menggabungkan fosfat dengan magnesium atau kalsium sebaiknya dipisah begitu faktor konsentrasi melebihi sekitar 5x.
Masih bisakah media yang berendapan digunakan?
- Media uji standar (TSA, PCA, MacConkey, dan sejenisnya): disiapkan dengan air murni sesuai petunjuk, seharusnya tidak ada endapan. Jika ada, buat ulang dan periksa air serta penimbangannya; respons kultur mungkin sudah di luar spesifikasi.
- Media fermentasi: sedikit endapan putih, setelah dikocok, dapat digunakan dengan kesadaran bahwa sebagian fosfor dan magnesium tidak lagi berada dalam larutan. Jika jumlahnya bervariasi dari batch ke batch, kinerjanya juga akan bervariasi; beralihlah ke sterilisasi terpisah.
- Media terdefinisi: tidak dianjurkan. Setiap komponen dihitung, dan apa pun yang mengendap langsung memengaruhi pertumbuhan.
FAQ
Media jernih di dalam autoklaf dan berubah putih saat mendingin. Mengapa? Kelarutan kalsium dan magnesium fosfat berubah dengan suhu dan sebagian mengkristal saat mendingin. Penanganannya sama: air murni, sterilisasi terpisah, atau zat pengkelat.
Petunjuk media kering menyatakan "sedikit endapan setelah pemanasan adalah normal". Apa itu? Beberapa formulasi yang mengandung fosfat dan magnesium (misalnya media tertentu untuk bakteri asam laktat dan khamir) memang sedikit opalesen sesuai rancangannya dan petunjuknya menyatakan demikian; aduk perlahan dan tuang. Endapan yang tidak disebutkan dalam petunjuklah yang menjadi masalah.
Apakah endapan memengaruhi pembacaan cawan agar? Endapan membuat cawan berkabut, mengurangi kontras koloni saat menghitung, dan dapat menutupi reaksi warna pada media selektif. Siapkan semua media cawan dengan air murni dan buat ulang yang berendapan.
Mutu air seperti apa yang diperlukan? Air deionisasi atau air suling dengan konduktivitas di bawah 10 µS/cm sudah cukup untuk penyiapan media; air ultramurni tidak diperlukan. Sebagian besar metode uji nasional menetapkan "air suling atau air dengan kemurnian setara".