짧은 답
백색 또는 유백색 침전은 거의 항상 인산마그네슘이나 인산칼슘입니다. 인산염과 마그네슘·칼슘 이온의 용해도가 고온에서 떨어져 결정이 생기는 것입니다. 이는 검은 침전과 다릅니다. 검은 침전은 황 함유 아미노산에서 방출된 황화수소가 철과 반응하여 생긴 황화철입니다. 멸균 후 발효액의 검은 침전을 참고하십시오. 백색 침전은 그 자체로 독성은 없지만, 인·마그네슘·칼슘의 일부가 용액에서 빠져나갔다는 뜻이므로 합성배지와 발효 배지에서는 증식에 영향을 줍니다. 올바르게 조제한 표준 시험용 배지에는 침전이 생기지 않아야 하며, 생겼다면 물을 먼저 확인하십시오.
침전 구별하기
| 외관 | 가장 가능성 높은 것 | 원인 |
|---|---|---|
| 미세한 백색 분말, 흔들면 떠오르고 두면 가라앉음 | 인산마그네슘 또는 인산칼슘 | 인산염이 마그네슘이나 칼슘과 만남 |
| 유리벽에 붙는 백색 솜뭉치 | 변성 단백질 | 펩톤 과열 또는 pH가 크게 벗어남 |
| 회색~검은색 | 황화철 | 황 함유 아미노산과 철 |
| 갈색, 병 전체가 어두워짐 | 마이야르 산물 | 당과 아미노산의 과열 |
간단한 시험: 백색 인산염 침전은 묽은 염산 몇 방울을 넣으면 녹지만, 단백질 솜뭉치는 녹지 않습니다.
침전이 잘 생기는 조성
- 고농도 인산염과 마그네슘·칼슘이 함께 있는 경우: M9 계열의 합성배지, 그리고 제이인산칼륨, 황산마그네슘, 염화칼슘을 함께 쓰는 발효 배지.
- 수돗물로 조제한 경우: 수돗물의 경도 성분(칼슘, 마그네슘)이 조성 속 인산염과 반응합니다. 시험 검사실에서 가장 흔한 원인이며, 같은 분말을 정제수로 조제하면 문제가 없습니다.
- 알칼리성 pH: pH 7.5 이상에서 인산염이 마그네슘·칼슘과 더 쉽게 침전합니다.
- 농축액: 공간을 절약하려고 10배 농축액을 멸균하면 모든 성분이 10배 농축되어 있으므로 침전이 더 많이 생깁니다.
피하는 방법
- 정제수나 탈이온수로 조제합니다. 이것만으로 검사실 사례의 대부분이 없어집니다.
- 따로 멸균합니다: 마그네슘염과 칼슘염을 별도의 농축액으로 만들어 멸균하고, 배지가 50 °C 아래로 식은 뒤 무균적으로 첨가합니다. 인산염은 본 조성에 남겨 둡니다. 발효 배지의 표준 관행입니다.
- 킬레이트제를 첨가합니다: 리터당 수십 밀리그램의 구연산나트륨이나 EDTA가 마그네슘과 칼슘을 붙잡아 인산염과 결정화하는 것을 막습니다. 미량원소 용액에서 특히 효과적입니다.
- 멸균 전 pH를 알칼리성으로 두지 않습니다: 목표값으로 조정한 뒤 멸균하고, "떨어질 것을 감안해서 조금 높게"라고 지나치게 올리지 마십시오.
- 과도하게 농축하지 않습니다: 인산염과 마그네슘·칼슘이 함께 들어 있는 조성은 농축 배율이 약 5배를 넘으면 나누어야 합니다.
침전이 있는 배지를 그래도 쓸 수 있습니까?
- 표준 시험용 배지(TSA, PCA, MacConkey 등): 설명서대로 정제수로 조제했다면 침전이 없어야 합니다. 있다면 다시 만들고 물과 칭량을 확인하십시오. 배양 성능이 이미 규격을 벗어났을 수 있습니다.
- 발효 배지: 소량의 백색 침전은 흔들어서 쓸 수 있지만, 인과 마그네슘의 일부가 더 이상 용액에 없다는 점을 알고 써야 합니다. 침전량이 배치마다 다르면 성능도 배치마다 달라지므로 분리 멸균으로 전환하십시오.
- 합성배지: 권장하지 않습니다. 모든 성분이 계산된 것이므로 침전된 만큼 증식에 직접 영향을 줍니다.
자주 묻는 질문
배지가 오토클레이브 안에서는 맑았는데 식으면서 하얗게 변했습니다. 왜 그렇습니까? 인산칼슘과 인산마그네슘의 용해도는 온도에 따라 변하며, 식으면서 일부가 결정화합니다. 대책은 같습니다. 정제수, 분리 멸균 또는 킬레이트제입니다.
건조배지 설명서에 "가열 후 약간의 침전은 정상"이라고 되어 있습니다. 무슨 뜻입니까? 인산염과 마그네슘을 함유한 일부 조성(예를 들어 특정 유산균 배지와 효모 배지)은 설계상 약간 유백색이며, 설명서에 그렇게 적혀 있습니다. 흔들어 섞어서 분주하십시오. 설명서에 언급되지 않은 침전이 문제입니다.
침전이 한천 평판 판독에 영향을 줍니까? 평판이 흐려지고, 계수할 때 집락의 대비가 떨어지며, 선택배지에서는 색 반응을 가릴 수 있습니다. 모든 평판 배지는 정제수로 조제하고, 침전이 생긴 것은 다시 만드십시오.
어떤 수질이 필요합니까? 전기전도도 10 µS/cm 이하의 탈이온수나 증류수면 배지 조제에 충분하며, 초순수는 필요하지 않습니다. 대부분의 국가 시험법은 "증류수 또는 이와 동등한 순도의 물"로 규정합니다.