基本手順
- 秤量：規格書に記載された1 Lあたりの量を秤量し、精製水または蒸留水を使用します。乾燥培地は吸湿するため、開封後は速やかに秤量し、容器をすぐに密閉してください。
- 溶解：最終液量の約半分の水に撹拌しながら粉末を加え、その後定容します。ほとんどの液体培地は室温で溶解します。寒天を含む培地は、撹拌しながら加熱して完全に沸騰させ、液が透明になり容器壁に粒子が残らなくなるまで1分間保持する必要があります。
- pH確認（必要な場合）：ほとんどの処方は調整不要です。必要な場合は、25 °Cで測定しながら1 N NaOHまたは1 N HClで調整します。オートクレーブでpHがわずかに下がるため、滅菌前に行ってください。
- 分注：容器の3分の2を超えないように分注し、キャップは緩めておきます。
- 滅菌：通常は121 °Cで15分間です。糖分の多い処方や大容量の場合は、カラメル化を避けるため、規格書の指示に従って時間を短縮したり温度を下げたりする必要があります。
- 平板への分注：培地が45〜50 °Cまで冷めてから行います。熱すぎると結露が多くなり、冷めすぎると分注前に固まってしまいます。
よくある誤り
- 寒天が完全に溶ける前にオートクレーブし、ゲルが不均一になったり底に沈殿が生じたりする。
- 全量の水に袋ごと一気に投入し、表面に膜ができて内部に乾いた粉末が残る。
- 滅菌時間が長すぎて培地が濃色化し、性能が低下する（「オートクレーブ後に培地が濃くなったり濁ったりするのは正常ですか？」を参照）。
- 水道水で調製する。カルシウム、マグネシウム、塩素が一部の選択培地に影響します。
オートクレーブしてはいけない処方
抗生物質、一部の色素、その他の熱に不安定な添加物は、滅菌後に培地が約50 °Cまで冷めてから無菌的に加えます。規格書には「滅菌後に添加」する成分が明記されています。