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發酵槽起泡嚴重,跟培養基有關嗎?怎麼從配方端減少泡沫

撰稿與審閱:上鼎生技技術團隊發布日期

先給答案

泡沫主要由培養基裡的蛋白質和界面活性物質造成,通氣攪拌把它們打成穩定的泡。培養基端最有效的三件事:選胜肽比例高、大分子蛋白少的氮源(水解程度高的蛋白腖、超濾過的產品);不要為了保險多加氮源,過量的蛋白質只會變成泡;一開始就在培養基裡加基礎量的消泡劑,而不是等泡起來才補。消泡劑補到一定量還壓不住,就是配方或操作的問題,不是消泡劑不夠。

泡沫從哪裡來

泡沫需要兩個條件:有氣體進去,和有東西讓氣泡壁穩定。通氣與攪拌提供氣體,培養基與菌體提供穩定劑:

  • 大分子蛋白質:蛋白腖裡沒被切短的蛋白質、酵母抽出物裡的核酸與蛋白質複合物、牛肉抽出物裡的膠原蛋白片段。分子越大、越兩親性,泡越穩。
  • 菌體自己分泌的東西:表面活性素(芽孢桿菌的 surfactin 最有名)、胞外多醣、細胞裂解後釋出的蛋白質和脂質。發酵後段泡沫變多,多半是這個。
  • 培養基裡的油脂與乳化劑:聚山梨醇酯 80、卵磷脂、植物油。少量會消泡,過量反而穩定泡沫。

所以泡沫在不同階段有不同原因:剛接種就起泡是培養基的問題;對數期後段才起泡是菌體代謝物的問題;放罐前才起泡通常是細胞裂解。

哪些氮源比較會起泡

一般規律是:水解程度越低、大分子越多,越會起泡。

  • 起泡多:牛肉抽出物、明膠蛋白腖、低水解度的肉類蛋白腖、酵母自溶物(細胞壁殘渣多)。
  • 中等:一般的胰蛋白腖、大豆蛋白腖、酵母抽出物。
  • 起泡少:高水解度的蛋白腖(胺基氮比例高)、酪蛋白胺基酸、超濾過的蛋白腖與酵母抽出物(大分子已經被濾掉)。

同一類蛋白腖,看 COA 上的 AN/TN 比值:比值高的,大分子少、泡少。細胞培養級的超濾水解物起泡最少,但價格高,一般工業發酵不划算;工業發酵的折衷是選胺基氮比例高的蛋白腖,或把一部分蛋白腖換成無機氮源(硫酸銨、磷酸二氫銨)。

消泡劑怎麼用

  • 種類:聚醚類(最通用,用量少、耐高溫)、聚矽氧類(效果強、但下游純化與食品用途要確認法規)、植物油類(食品級製程常用,但本身是碳源,會被吃掉,後段要補)。
  • 用量:基礎量先加進培養基一起滅菌,一般 0.01 到 0.05%;發酵中依泡沫探針補加。每次補加的量要小,一次倒太多會讓氧傳遞變差、菌反而長不好。
  • 上限:聚醚類累計超過 0.2 到 0.3% 還壓不住,就要回頭看配方和通氣條件了。

消泡劑會降低氧傳遞效率,不是越多越好。

什麼時候該改配方而不是加消泡劑

  • 剛接種、菌還沒長就滿槽泡沫:培養基蛋白質過量或氮源種類不對,減量或換高水解度的蛋白腖。
  • 每批都要補很多消泡劑:把部分有機氮源換成無機氮源,或改用流加,讓槽裡任何時刻的氮源濃度都不高。
  • 泡沫帶走菌體、產量不穩:先降通氣量或攪拌轉速到溶氧剛好夠的程度,再談配方。

常見問題

搖瓶不起泡,上發酵槽才起泡,為什麼? 搖瓶沒有強制通氣,氣液界面小。發酵槽每分鐘打進幾個槽體積的空氣,再加攪拌葉把氣泡打碎,同一個配方在搖瓶看不出來的起泡性,在槽裡會全部表現出來。選配方時做搖瓶試驗要另外做一個「起泡測試」:把配好的培養基搖勻後看泡沫消退的時間。

換一支蛋白腖,泡沫差很多,正常嗎? 正常。不同原料、不同水解度,起泡性可以差好幾倍。換氮源時把起泡性當成選型指標之一,跟產量一起看。

食品級製程可以用哪種消泡劑? 要用符合食品添加物規定的品項,各國清單不同;台灣依食藥署的食品添加物使用範圍及限量標準。上鼎的蛋白腖本身不含消泡劑,配方裡要加什麼由製程決定。

有沒有起泡性低的蛋白腖可以推薦? 胺基氮比例高的酵母蛋白腖與大豆蛋白腖起泡性較低,細胞培養級的超濾產品最低。告訴我們菌種、通氣條件和目前用的氮源,我們可以建議幾支並提供樣品做起泡與生長的平行比較,見樣品申請。

撰稿與審閱:上鼎生技技術團隊上鼎生技自 2002 年起投入蛋白腖與微生物培養基生產,擁有 ISO 22000 與 Halal 認證及自有品管實驗室。

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