要点
選択培地は、目的外の菌を抑える阻害剤（胆汁酸塩、色素、抗生物質、高塩濃度、テルライト）と、目的菌を見えるようにする指示薬に依存しています。失敗には二つの形があります。「目的外の菌が生えた」は通常、阻害剤が効力を失ったことを意味します。過滅菌、平板の長期保存、滅菌後に加えるべき添加剤の入れ忘れです。「目的菌が生えなかった」は通常、阻害が強すぎるか栄養が不足していることを意味します。添加剤の過量、平板の乾燥、あるいは目的菌がもともと損傷していた場合です。いずれの場合も、標準菌株を用いた並行試験で、培地と試料のどちらが原因かを一日で判定できます。
目的外の菌が生える：阻害剤が失われた
- 過滅菌。 胆汁酸塩、クリスタルバイオレット、ブリリアントグリーン、ニュートラルレッドは熱に弱く、121 °Cで15分が上限です。再オートクレーブや大きなボトルの長時間加熱はこれらを弱めます。「加熱溶解のみ、オートクレーブ不可」と説明書にある培地（m-Endo、一部の酵素基質培地）は絶対にオートクレーブに入れないでください。
- 添加剤の不足または誤り。 Baird-Parkerには卵黄テルライト、MYPにはポリミキシン、Oxfordには抗生物質添加剤が必要です。基礎培地だけでは選択性はなく、添加剤を入れなければすべてが生えます。
- 調製後の保存が長すぎる。 色素や抗生物質を含む平板は冷蔵で1～2週間すると阻害力を失い、抗生物質添加剤を加えた後はさらに短くなります。説明書に従ってください。
- pHのずれ。 pHが低いとMacConkeyの胆汁酸塩の阻害力は弱まります。滅菌後にpHが大きく下がる場合は調製を見直してください。
- 接種量が多すぎる。 菌量が非常に多いと、阻害剤は排除ではなく減少させるにとどまり、背景菌が生え残ります。塗布する前に希釈してください。
目的菌が生えない：阻害が強すぎるか栄養が足りない
- 添加剤の過量。 抗生物質やテルライトを2倍入れると目的菌も抑えられます。「数滴ほど」ではなく、計量して添加してください。
- 平板の乾燥や保存期間超過。 損傷した目的菌は乾いた表面で定着できず、背景菌に機会を与えます。
- 目的菌の損傷。 加熱、凍結、酸性化を受けた試料の細胞は、まず非選択培地または増菌培地で回復させる必要があります。選択培地に直接塗布すると阻害剤に殺されます。試験法に前増菌が組み込まれているのはこのためです。
- 培養条件。 温度、時間、雰囲気（ビブリオとカンピロバクターにはそれぞれ要求があります）が誤っていると、培地に問題がなくても目的菌は生えません。
標準菌株で判定する
すべての選択培地には性能試験用の菌株が定められています。正しい反応で生えるべき目的菌と、抑えられるべき非目的菌です。例：
| 培地 | 生えるべき菌 | 抑えられるべき菌 |
|---|---|---|
| MacConkey Agar | E. coli（赤）、Salmonella（無色） | S. aureus、Enterococcus |
| Baird-Parker | S. aureus（黒、透明な輪） | E. coli、Bacillus |
| XLD | Salmonella（赤、中心が黒） | E. coli（黄）、S. aureus |
| TCBS | Vibrio parahaemolyticus（緑）、V. cholerae（黄） | E. coli |
| Cetrimide | Pseudomonas aeruginosa（蛍光） | E. coli、S. aureus |
方法：新しく調製した培地と疑わしい培地の両方に目的菌株と非目的菌株を接種し、試料と並行して培養します。疑わしい平板で非目的菌が生えれば、培地が失敗しています。標準菌株が正常に挙動し、試料だけがおかしいなら、問題は試料です。ISO 11133にこの試験の全容が定められており、試験室の品質システムでは通常、培地の全ロットに対してこれを要求します。
作り直すべき場合
- 標準菌株試験に不合格：バッチを廃棄して作り直し、原因（滅菌記録、添加剤のロットと添加量、水）を探します。
- 保存期限を過ぎた平板、ひび割れや乾燥した表面、異常な色：使用しないでください。
- 開封後に粉末が固結または変色：固結や変色した乾燥培地は使えるかをご覧ください。
よくある質問
基礎培地と完全培地の違いは何ですか 「基礎培地（Base）」は、熱に耐えない成分（卵黄、血液、抗生物質、テルライト）を滅菌後に添加剤として加える必要があるものです。名称に「Base」が付く製品はすべてこの種類で、何を、どれだけ、何度で加えるかは説明書に記載されています。
酵素基質培地の発色が薄いです。培地が原因ですか まず培養時間（大半の呈色反応には24時間まるまる必要です）と、平板を暗所で保存していたか（発色基質は光で分解します）を確認してください。どちらも問題なければ、標準菌株で試験します。
自分で抗生物質を加えて選択培地にできますか 可能ですが、種類、濃度、添加温度は試験法に従う必要があり、添加後の保存期間は短くなります。試験法が添加剤を指定している場合は、市販の添加剤のほうが一貫性があります。
STBIOの選択培地には性能データが付いていますか 全ロットに、標準菌株に対する培養性能を含むCOAを添付しています。性能試験報告書の全文はご要望に応じて提供します。各製品ページには、その培地がどの公定法のどの段階に属するかも記載しています。公定法から培地を探すをご覧ください。