要点
ロット変更後に収量が下がる場合、原因の大半は三つに分かれ、可能性の高い順に次のとおりです。第一に、工程の別の何かが同時に変わっていた（新しい種菌バイアル、新しい糖のドラム、変更された滅菌プログラムなど）ことで、ロット変更はたまたま重なっただけという場合。第二に、新しいロットは規格内だがレンジの反対側にある場合で、たとえばアミノ態窒素が上限付近から下限付近に移ると、感受性の高い菌株はそれに反応します。第三に、ロットに本当に不良がある場合。この順序で確認します。まず工程、次にCOA、そのうえでようやくペプトンの並列比較試験です。
ステップ1：変わったのがペプトンだけであることを確認する
変更前後それぞれ一週間分の記録を並べます。種培養の培養時間と接種量、糖やその他の原料のロット番号、滅菌温度と時間、pHメーターの校正、インキュベーターまたは発酵槽の温度ログ。実際には、「ロットを替えたら下がった」の半分以上は、同じ日に変わった別の要因が原因だと判明します。変数が二つ以上ある場合は、まだ結論を出さないでください。
ステップ2：二つのCOAを並べて比較する
COAの各項目には規格範囲があり、二つのロットがどちらも規格内でありながら同じではない、ということは起こります。次の項目を見ます。
- 総窒素（TN）とアミノ態窒素（AN）。 TNはタンパク質含量を、ANは加水分解の程度を反映します。AN/TN比率が高いほど低分子ペプチドと遊離アミノ酸が多く、細胞はそれらを速やかに消費するため遅滞期は短くなりますが、培養後半に窒素が不足することがあります。比率が低いとその逆になります。乳酸菌やBacillusなど窒素の形態に敏感な菌株では、比率の1～2ポイントの差が結果に現れます。
- 灰分と塩化ナトリウム。 浸透圧とミネラル供給に影響し、塩に敏感な菌株では重要です。
- 溶液のpHと清澄度。 pHのずれは調製した培地の初期pHを変え、清澄度の低下は通常、高分子が多いことを意味します。
- 乾燥減量。 水分の多いロットでは、10 g量り取っても実際のペプトン量は少なくなります。
数値の読み方は総窒素、アミノ態窒素とCOAをご覧ください。
ステップ3：ペプトンだけが異なる試験を行う
振盪フラスコで十分で、発酵槽は必要ありません。同じ菌株、同じ種培養、同じ日、他のすべての原料は同じロットとし、ペプトンだけを旧ロットと新ロットに分け、各3連で行います。菌数（ODまたは平板菌数）と目的産物を測定します。ロット間の差が反復間の差を上回る場合に限り、ペプトンが原因と確定できます。反復間のばらつきがすでにロット間の差と同程度なら、問題は原料ではなく工程の安定性です。
これを可能にするのは、旧ロットの保存サンプルを残しておくことです。入荷した全ロットについて100 gを密閉して冷蔵保存し、そのロットを使い切ってから6か月後まで保管してください。
同じペプトンでもロットごとに差が出る理由
ペプトンは天然タンパク質の加水分解物です。原料そのもの（大豆、酵母、カゼイン）が季節によって変動し、加水分解の程度も規格範囲の中で動きます。規格範囲は、範囲内のすべてのロットが性能を発揮することの保証であり、すべてのロットが同一であることの保証ではありません。したがって：
- 安定性の要求が厳しい工程では、生産前に新ロットを試験するのが標準的な手順です。
- 供給元に対して、たとえばAN/TNが定められた範囲内のロットのみといった、より狭い幅を求めることができます。
- 生産キャンペーンの前に大きなロットを一つ購入して通して使うのが、この変数を取り除く最も簡単な方法です。
ペプトンが原因と確定したら
二つのCOAと試験データを供給元に送り、そのロットの製造記録の確認と、必要であれば交換を依頼します。STBIOでは全ロットにCOAを添付し、培養性能データはご要望に応じて提供しており、新ロットのサンプルは購入前に試験いただけます。規格の幅を限定する必要があるお客様は、見積り依頼の際にその旨をお伝えください。サンプル請求をご覧ください。
よくある質問
COAはすべて規格内で、供給元もロットに問題はないと言いますが、収量が下がっています。どうすればよいですか 規格内であることは同一であることを意味しません。試験データを供給元に示し、範囲だけでなく、今回のロットと前回のロットの実測値の全項目を求めてください。レンジの反対側にある項目がたいてい見つかります。
添加量を増やして補えますか 差が窒素含量にあるなら、総窒素に比例して添加量を調整するのは一時的な対処として有効です。差が加水分解の程度にあるなら、ペプトンを増やしても解決しません。ロットを替えるか処方を調整してください。
入荷したペプトンはどのくらいの頻度で確認すべきですか 全ロットです。最低限COAを比較し、pHと清澄度を測定します。重要な工程では振盪フラスコでの増殖曲線を加えてください。問題を後からさかのぼって追うよりはるかに安上がりです。
特定ロットのCOAはどこで確認できますか STBIO製品については、COA検索ページでRef.とロット番号を入力してください。