Jawapan ringkas
Media selektif bergantung pada perencat (garam hempedu, pewarna, antibiotik, garam tinggi, telurit) untuk menahan organisma yang tidak dikehendaki dan pada penunjuk untuk menjadikan sasaran kelihatan. Kegagalan datang dalam dua bentuk. "Organisma yang salah tumbuh" biasanya bermaksud perencat telah hilang kekuatannya: pensterilan berlebihan, plat disimpan terlalu lama, atau suplemen pascapensterilan yang tidak pernah ditambah. "Organisma yang betul tidak tumbuh" biasanya bermaksud perencatan terlalu kuat atau nutrisi terlalu lemah: suplemen terlebih dos, plat terlalu kering, atau sel sasaran yang sudah cedera dari awal. Dalam kedua-dua kes, ujian serentak dengan strain rujukan menentukan dalam masa sehari sama ada media atau sampel yang bermasalah.
Organisma yang salah tumbuh: perencat telah gagal
- Pensterilan berlebihan. Garam hempedu, kristal violet, hijau berlian dan merah neutral sensitif terhadap haba; 121 °C selama 15 minit ialah maksimum, dan pengautoklafan semula atau pemanasan lama botol besar melemahkannya. Media yang arahannya menyatakan "didihkan untuk melarutkan, jangan autoklaf" (m-Endo, sesetengah media kromogenik) tidak boleh sekali-kali dimasukkan ke dalam autoklaf.
- Suplemen tiada atau salah. Baird-Parker memerlukan kuning telur telurit, MYP memerlukan polimiksin, Oxford memerlukan suplemen antibiotiknya. Media asas sahaja tidak mempunyai selektiviti; tinggalkan suplemen dan semuanya tumbuh.
- Disimpan terlalu lama selepas penyediaan. Plat yang mengandungi pewarna dan antibiotik hilang perencatan selepas satu hingga dua minggu dalam penyimpanan sejuk; setelah suplemen antibiotik ditambah, jangka hayatnya lebih pendek lagi. Ikut arahan.
- pH tersasar. Pada pH rendah, garam hempedu dalam MacConkey kurang merencat; jika pH menurun terlalu jauh selepas pensterilan, semak semula penyediaan.
- Inokulum terlalu berat. Dengan beban yang sangat tinggi, perencat mengurangkan dan bukannya menghapuskan; flora latar masih muncul. Cairkan sebelum menuang ke plat.
Organisma yang betul tidak tumbuh: perencatan terlalu banyak atau nutrisi terlalu sedikit
- Suplemen terlebih dos. Gandakan antibiotik atau telurit dan sasaran juga direncat. Dos mengikut ukuran, bukan "lebih kurang beberapa titis".
- Plat terlalu kering atau terlalu lama. Sel sasaran yang cedera tidak dapat bertapak pada permukaan yang kering, yang memberi peluang kepada flora latar.
- Sel sasaran yang cedera. Sampel yang telah dipanaskan, dibeku atau diasidkan mengandungi sel yang perlu pulih dahulu dalam media bukan selektif atau kaldu pengayaan; jika dituang terus ke media selektif, ia dibunuh oleh perencat. Inilah sebabnya kaedah ujian merangkumi prapengayaan.
- Keadaan pengeraman. Suhu, masa atau atmosfera yang salah (vibrio dan campylobacter masing-masing mempunyai keperluan tersendiri) dan sasaran tidak tumbuh bukan kerana kesalahan media.
Memutuskan dengan strain rujukan
Setiap media selektif mempunyai strain ujian prestasi yang ditetapkan: sasaran yang sepatutnya tumbuh dengan tindak balas yang betul dan bukan sasaran yang sepatutnya direncat. Contohnya:
| Media | Sepatutnya tumbuh | Sepatutnya direncat |
|---|---|---|
| MacConkey Agar | E. coli (merah), Salmonella (tanpa warna) | S. aureus, Enterococcus |
| Baird-Parker | S. aureus (hitam dengan halo jernih) | E. coli, Bacillus |
| XLD | Salmonella (merah dengan pusat hitam) | E. coli (kuning), S. aureus |
| TCBS | Vibrio parahaemolyticus (hijau), V. cholerae (kuning) | E. coli |
| Cetrimide | Pseudomonas aeruginosa (berpendarfluor) | E. coli, S. aureus |
Kaedah: inokulasi media yang baru disediakan dan media yang disyaki dengan strain sasaran dan bukan sasaran, dieram bersama sampel. Jika bukan sasaran tumbuh pada plat yang disyaki, media telah gagal; jika strain rujukan berkelakuan normal dan hanya sampel yang ganjil, masalahnya ialah sampel. ISO 11133 menggariskan ujian ini sepenuhnya, dan sistem kualiti makmal biasanya memerlukannya bagi setiap lot media.
Bila perlu disediakan semula
- Ujian strain rujukan gagal: buang kelompok itu, sediakan semula, dan cari puncanya (rekod pensterilan, lot dan dos suplemen, air).
- Plat melepasi had penyimpanan, permukaan retak atau kering, warna luar biasa: jangan gunakan.
- Serbuk berketul atau berubah warna selepas dibuka: lihat Bolehkah media kering yang berketul atau berubah warna masih digunakan.
Soalan lazim
Apakah perbezaan antara media asas dan media lengkap? "Asas" masih memerlukan suplemen (kuning telur, darah, antibiotik, telurit) yang ditambah selepas pensterilan kerana komponen tersebut tidak tahan haba. Mana-mana produk dengan "Base" dalam namanya ialah jenis ini, dan arahan menyatakan apa yang perlu ditambah, berapa banyak dan pada suhu apa.
Warna pada media kromogenik saya pudar. Adakah media yang bermasalah? Periksa dahulu masa pengeraman (kebanyakan tindak balas warna memerlukan 24 jam penuh) dan sama ada plat disimpan dalam gelap (substrat kromogenik terurai dalam cahaya). Jika kedua-duanya baik, uji dengan strain rujukan.
Bolehkah saya menambah antibiotik sendiri untuk membuat media selektif? Boleh, tetapi jenis, kepekatan dan suhu penambahan mesti mengikut kaedah, dan jangka hayat selepas itu adalah pendek. Jika kaedah menetapkan suplemen, suplemen komersial lebih konsisten.
Adakah media selektif STBIO disertakan dengan data prestasi? Setiap lot dihantar bersama COA termasuk tindak balas kultur terhadap strain rujukan; laporan ujian prestasi penuh tersedia atas permintaan. Setiap halaman produk juga menyatakan kaedah rasmi mana media itu tergolong dan dalam langkah yang mana; lihat cari media mengikut kaedah standard.