C-Cell サンプル試験プロトコル
C-Cell サンプルが届いたらこのページの手順で試験してください。2〜3 週間で、どのグレードをどの濃度で使えば低血清でも細胞が増殖を保てるかがわかります。データをお送りいただければ解析をお手伝いします。
1. 試験するグレード
| CHO | S104 · P112 · Y109 | メーカーは主に CHO で検証 |
| HEK293 | P112 · G115 · S204 | 公開研究で発現量上位 3 種 |
| Vero | W106 · S104 · P112 | 公開された Vero 血清削減研究 |
| MSC / EVs | P112 · S104 | 公開された MSC 細胞外小胞研究 |
| Sf9 | Y109 · Y121 | メーカー資料で昆虫細胞に適用 |
2. 原液の調製
- 試験する培地そのもので 1 L あたり 30 g（3%、w/v）の原液を調製します。100 mL に 3 g を加え、完全に溶けるまで撹拌します。
- 0.2 µm フィルターでろ過滅菌します。
- 同じ培地で段階的に希釈して試験濃度にします。
- 原液は使用当日に調製してください。
3. 用量：接着細胞と浮遊細胞で 10 倍の差
公開研究では、接着型の Vero 細胞は 1 L あたり 0.5 g、浮遊型の HEK293 は 1 L あたり 5 g を使用しています。接着細胞では高すぎる濃度がかえって効果を示さないことがあるため、培養形態に応じて 3 濃度を選びます。
| 低 | 中 | 高 | |
|---|---|---|---|
| 接着型（Vero、MSC） | 0.25 g/L | 0.5 g/L | 1 g/L |
| 浮遊型（HEK293、CHO、Sf9） | 1 g/L | 2.5 g/L | 5 g/L |
4. 試験区
| A | 現在の濃度（例：10%） | なし |
| B | 削減（例：5%） | なし |
| C · D · E | B と同じ | 低・中・高の 3 濃度 |
各 C-Cell グレードごとに C・D・E の 3 区を設け、各区 3 反復以上で行います。どこまで減らせるかを見るには、さらに低い血清濃度（例：1%）の区を追加します。すでに無血清系の場合、B は現行処方とし、C〜E に C-Cell を加えます。
5. 培養と記録
- 播種密度、培地交換、回収時期は通常どおりとし、変えるのは血清と C-Cell だけにします。
- 長期安定性を見るには 3〜5 継代を続け、各継代の倍加時間を記録します。
- 記録項目：生細胞密度と生存率、倍加時間、産物量（抗体、組換えタンパク質、ウイルス力価、細胞外小胞数）、細胞形態。
6. 結果の送付
各区のデータを 1 つの表にまとめて [email protected] までお送りください。解析をお手伝いし、最適なグレードと使用濃度をご提案します。
本プロトコルは一般的な指針です。各研究室の細胞株とプロセスに合わせて調整してください。引用した研究結果は原著者に帰属し、当社の製品主張ではありません。Organotechnie® および C-Cell は Organotechnie S.A.S. の商標であり、ST BIO, INC. は台湾における代理店です。