คำตอบโดยสรุป
อาหารเลี้ยงเชื้อแบบเลือกอาศัยสารยับยั้ง (เกลือน้ำดี สีย้อม ยาปฏิชีวนะ เกลือสูง เทลลูไรต์) เพื่อกดเชื้อที่ไม่ต้องการ และอาศัยอินดิเคเตอร์เพื่อให้เห็นเชื้อเป้าหมาย ความล้มเหลวมีสองรูปแบบ "เชื้อที่ไม่ต้องการเจริญ" มักหมายถึงสารยับยั้งหมดฤทธิ์: ฆ่าเชื้อมากเกิน จานเก็บนานเกิน หรือสารเสริมหลังฆ่าเชื้อที่ไม่ได้เติมเลย "เชื้อเป้าหมายไม่เจริญ" มักหมายถึงการยับยั้งแรงเกินหรือสารอาหารอ่อนเกิน: สารเสริมเกินปริมาณ จานแห้งเกิน หรือเซลล์เป้าหมายบาดเจ็บมาตั้งแต่ต้น ทั้งสองกรณี การทดสอบคู่ขนานด้วยสายพันธุ์อ้างอิงจะตัดสินได้ภายในหนึ่งวันว่าเป็นที่อาหารเลี้ยงเชื้อหรือตัวอย่าง
เชื้อที่ไม่ต้องการเจริญ: สารยับยั้งล้มเหลว
- ฆ่าเชื้อมากเกิน เกลือน้ำดี คริสตัลไวโอเลต บริลเลียนต์กรีน และนิวทรัลเรดไวต่อความร้อน 121 °C 15 นาทีคือค่าสูงสุด และการนึ่งซ้ำหรือให้ความร้อนขวดใหญ่นานทำให้อ่อนฤทธิ์ อาหารเลี้ยงเชื้อที่คำแนะนำระบุ "ต้มให้ละลาย ห้ามนึ่ง" (m-Endo อาหารเลี้ยงเชื้อโครโมเจนิกบางชนิด) ห้ามเข้าหม้อนึ่งความดันเด็ดขาด
- สารเสริมขาดหรือผิด Baird-Parker ต้องใช้ egg yolk tellurite MYP ต้องใช้ polymyxin Oxford ต้องใช้สารเสริมยาปฏิชีวนะของมัน อาหารเลี้ยงเชื้อฐานเพียงอย่างเดียวไม่มีความสามารถในการเลือก ไม่เติมสารเสริมแล้วทุกอย่างเจริญหมด
- เก็บนานเกินหลังเตรียม จานที่มีสีย้อมและยาปฏิชีวนะสูญเสียการยับยั้งหลังแช่เย็นหนึ่งถึงสองสัปดาห์ เมื่อเติมสารเสริมยาปฏิชีวนะแล้วอายุการเก็บสั้นลงอีก ให้ทำตามคำแนะนำ
- pH คลาด ที่ pH ต่ำ เกลือน้ำดีใน MacConkey ยับยั้งน้อยลง หาก pH ลดมากเกินหลังฆ่าเชื้อ ให้ทบทวนการเตรียม
- หัวเชื้อหนาแน่นเกิน เมื่อปริมาณเชื้อสูงมาก สารยับยั้งเพียงลดจำนวนแต่ไม่กำจัดทั้งหมด เชื้อพื้นหลังยังผ่านมาได้ ให้เจือจางก่อนเพาะ
เชื้อเป้าหมายไม่เจริญ: ยับยั้งมากเกินหรือสารอาหารน้อยเกิน
- สารเสริมเกินปริมาณ ใส่ยาปฏิชีวนะหรือเทลลูไรต์สองเท่าแล้วเชื้อเป้าหมายก็ถูกกดด้วย กำหนดปริมาณด้วยการวัด ไม่ใช่ "ประมาณสองสามหยด"
- จานแห้งเกินหรือเก่าเกิน เซลล์เป้าหมายที่บาดเจ็บตั้งตัวบนผิวที่แห้งไม่ได้ ซึ่งเปิดโอกาสให้เชื้อพื้นหลัง
- เซลล์เป้าหมายบาดเจ็บ ตัวอย่างที่ผ่านความร้อน แช่แข็ง หรือกรด มีเซลล์ที่ต้องฟื้นตัวในอาหารเลี้ยงเชื้อแบบไม่เลือกหรือน้ำเลี้ยงเชื้อเพิ่มจำนวนก่อน หากเพาะลงอาหารเลี้ยงเชื้อแบบเลือกโดยตรงจะถูกสารยับยั้งฆ่า นี่คือเหตุผลที่วิธีทดสอบมีขั้นเพิ่มจำนวนเบื้องต้น
- เงื่อนไขการบ่ม อุณหภูมิ เวลา หรือบรรยากาศผิด (vibrio และ campylobacter ต่างมีความต้องการเฉพาะ) แล้วเชื้อเป้าหมายไม่เจริญโดยไม่ใช่ความผิดของอาหารเลี้ยงเชื้อ
ตัดสินด้วยสายพันธุ์อ้างอิง
อาหารเลี้ยงเชื้อแบบเลือกทุกชนิดมีสายพันธุ์ทดสอบสมรรถนะที่กำหนดไว้: เชื้อเป้าหมายที่ควรเจริญพร้อมปฏิกิริยาที่ถูกต้อง และเชื้อที่ไม่ใช่เป้าหมายที่ควรถูกยับยั้ง ตัวอย่างเช่น:
| อาหารเลี้ยงเชื้อ | ควรเจริญ | ควรถูกยับยั้ง |
|---|---|---|
| MacConkey Agar | E. coli (แดง), Salmonella (ไม่มีสี) | S. aureus, Enterococcus |
| Baird-Parker | S. aureus (ดำพร้อมวงใสรอบ) | E. coli, Bacillus |
| XLD | Salmonella (แดงตรงกลางดำ) | E. coli (เหลือง), S. aureus |
| TCBS | Vibrio parahaemolyticus (เขียว), V. cholerae (เหลือง) | E. coli |
| Cetrimide | Pseudomonas aeruginosa (เรืองแสง) | E. coli, S. aureus |
วิธี: ใส่เชื้อทั้งสายพันธุ์เป้าหมายและไม่ใช่เป้าหมายลงอาหารเลี้ยงเชื้อที่เตรียมใหม่และอาหารเลี้ยงเชื้อที่สงสัย บ่มควบคู่กับตัวอย่าง หากเชื้อที่ไม่ใช่เป้าหมายเจริญบนจานที่สงสัย อาหารเลี้ยงเชื้อล้มเหลว หากสายพันธุ์อ้างอิงให้ผลปกติและมีเพียงตัวอย่างที่ผิดปกติ ปัญหาอยู่ที่ตัวอย่าง ISO 11133 กำหนดการทดสอบนี้ไว้ครบถ้วน และระบบคุณภาพของห้องปฏิบัติการมักกำหนดให้ทำกับอาหารเลี้ยงเชื้อทุกล็อต
เมื่อใดควรเตรียมใหม่
- การทดสอบด้วยสายพันธุ์อ้างอิงไม่ผ่าน: ทิ้งชุดนั้น เตรียมใหม่ และหาสาเหตุ (บันทึกการฆ่าเชื้อ ล็อตและปริมาณสารเสริม น้ำ)
- จานเกินอายุการเก็บ ผิวแตกหรือแห้ง สีผิดปกติ: ห้ามใช้
- ผงจับตัวเป็นก้อนหรือเปลี่ยนสีหลังเปิด: ดูอาหารเลี้ยงเชื้อชนิดผงที่จับตัวเป็นก้อนหรือเปลี่ยนสียังใช้ได้ไหม
คำถามที่พบบ่อย
อาหารเลี้ยงเชื้อฐาน (base) กับอาหารเลี้ยงเชื้อสมบูรณ์ต่างกันอย่างไร? "ฐาน" ยังต้องเติมสารเสริม (ไข่แดง เลือด ยาปฏิชีวนะ เทลลูไรต์) หลังฆ่าเชื้อ เพราะส่วนประกอบเหล่านั้นไม่ทนความร้อน ผลิตภัณฑ์ใดที่มีคำว่า "Base" ในชื่อเป็นชนิดนี้ และคำแนะนำระบุว่าต้องเติมอะไร เท่าใด และที่อุณหภูมิใด
สีบนอาหารเลี้ยงเชื้อโครโมเจนิกของฉันจาง เป็นที่อาหารเลี้ยงเชื้อหรือไม่? ตรวจเวลาบ่มก่อน (ปฏิกิริยาสีส่วนใหญ่ต้องการ 24 ชั่วโมงเต็ม) และจานเก็บในที่มืดหรือไม่ (สับสเตรตโครโมเจนิกสลายตัวเมื่อโดนแสง) หากทั้งสองข้อปกติ ให้ทดสอบด้วยสายพันธุ์อ้างอิง
เติมยาปฏิชีวนะเองเพื่อทำอาหารเลี้ยงเชื้อแบบเลือกได้ไหม? ได้ แต่ชนิด ความเข้มข้น และอุณหภูมิที่เติมต้องเป็นไปตามวิธี และอายุการเก็บหลังจากนั้นสั้น หากวิธีกำหนดสารเสริมไว้ สารเสริมสำเร็จรูปจะสม่ำเสมอกว่า
อาหารเลี้ยงเชื้อแบบเลือกของ STBIO มีข้อมูลสมรรถนะมาด้วยไหม? ทุกล็อตมาพร้อม COA ที่รวมการตอบสนองของเชื้อต่อสายพันธุ์อ้างอิง รายงานการทดสอบสมรรถนะฉบับเต็มขอได้ตามคำขอ หน้าผลิตภัณฑ์แต่ละรายการยังระบุว่าอาหารเลี้ยงเชื้อนั้นอยู่ในวิธีมาตรฐานใดและขั้นตอนใด ดูค้นหาอาหารเลี้ยงเชื้อตามวิธีมาตรฐาน