Jawapan ringkas
Mendakan putih atau seperti susu hampir selalu ialah magnesium atau kalsium fosfat: keterlarutan fosfat bersama ion magnesium dan kalsium menurun pada suhu tinggi dan hablur terbentuk. Ini berbeza daripada mendakan hitam, iaitu ferum sulfida yang terbentuk daripada hidrogen sulfida yang dibebaskan oleh asid amino sulfur yang bertindak balas dengan ferum; lihat Mendakan hitam dalam kaldu fermentasi selepas pensterilan. Mendakan putih tidak toksik dengan sendirinya, tetapi ia bermaksud sebahagian fosforus, magnesium dan kalsium telah keluar daripada larutan, yang menjejaskan pertumbuhan dalam media tertakrif dan media fermentasi. Media ujian standard yang disediakan dengan betul tidak sepatutnya menunjukkan mendakan; jika ada, periksa air dahulu.
Membezakan mendakan
| Rupa | Paling berkemungkinan | Asal |
|---|---|---|
| Serbuk putih halus, terampai apabila digoncang, mengenap apabila dibiarkan | Magnesium atau kalsium fosfat | Fosfat bertemu magnesium atau kalsium |
| Gumpalan putih melekat pada kaca | Protein ternyahasli | Pepton terlebih panas atau pH jauh tersasar |
| Kelabu hingga hitam | Ferum sulfida | Asid amino sulfur bersama ferum |
| Perang, seluruh botol lebih gelap | Hasil Maillard | Gula dan asid amino terlebih panas |
Ujian mudah: mendakan fosfat putih larut apabila ditambah beberapa titis asid hidroklorik cair; gumpalan protein tidak.
Formulasi yang mudah mengalaminya
- Fosfat tinggi bersama magnesium dan kalsium: media tertakrif jenis M9, dan media fermentasi yang menggabungkan dikalium fosfat, magnesium sulfat dan kalsium klorida.
- Disediakan dengan air paip: keliatan (kalsium, magnesium) dalam air paip bertindak balas dengan fosfat dalam formulasi. Ini punca paling lazim di makmal ujian; serbuk yang sama disediakan dalam air tulen tidak bermasalah.
- pH beralkali: fosfat termendak bersama magnesium dan kalsium dengan lebih mudah pada pH melebihi 7.5.
- Larutan pekat: larutan pekat 10x yang disterilkan untuk menjimatkan ruang lebih banyak termendak kerana semuanya sepuluh kali lebih pekat.
Cara mengelakkannya
- Sediakan dengan air tulen atau air ternyahion. Ini sahaja menyingkirkan kebanyakan kes di makmal.
- Sterilkan secara berasingan: sediakan garam magnesium dan kalsium sebagai larutan pekat yang berasingan, sterilkan, dan tambah secara aseptik selepas media menyejuk di bawah 50 °C. Kekalkan fosfat dalam formulasi utama. Ini amalan standard bagi media fermentasi.
- Tambah agen pengkelat: berpuluh miligram seliter natrium sitrat atau EDTA memegang magnesium dan kalsium dan menghalangnya daripada menghablur bersama fosfat. Amat berkesan dalam larutan unsur surih.
- Jangan biarkan pH prapensterilan beralkali: laraskan kepada sasaran dan sterilkan; jangan lebihkan "sedikit tinggi untuk mengambil kira penurunan".
- Jangan terlebih pekat: formulasi dengan fosfat bersama magnesium atau kalsium perlu dipisahkan apabila faktor kepekatan melebihi kira-kira 5x.
Bolehkah media dengan mendakan masih digunakan?
- Media ujian standard (TSA, PCA, MacConkey dan seumpamanya): disediakan dalam air tulen mengikut arahan, tidak sepatutnya ada mendakan. Jika ada, sediakan semula dan periksa air serta penimbangan; tindak balas kultur mungkin sudah di luar spesifikasi.
- Media fermentasi: sedikit mendakan putih, setelah digoncang, boleh digunakan, dengan kesedaran bahawa sebahagian fosforus dan magnesium tidak lagi dalam larutan. Jika jumlahnya berbeza dari kelompok ke kelompok, prestasi juga akan berbeza; beralih kepada pensterilan berasingan.
- Media tertakrif: tidak disyorkan. Setiap komponen dikira, dan apa sahaja yang termendak secara langsung menjejaskan pertumbuhan.
Soalan lazim
Media jernih dalam autoklaf dan menjadi putih semasa menyejuk. Mengapa? Keterlarutan kalsium dan magnesium fosfat berubah dengan suhu dan sebahagiannya menghablur semasa penyejukan. Penyelesaiannya sama: air tulen, pensterilan berasingan atau agen pengkelat.
Arahan media kering menyatakan "sedikit mendakan selepas pemanasan adalah normal". Apakah itu? Sesetengah formulasi yang mengandungi fosfat dan magnesium (contohnya media tertentu bagi bakteria asid laktik dan yis) memang sedikit opalesen mengikut reka bentuk dan arahan menyatakannya; goncang perlahan dan agihkan. Mendakan yang tidak disebut dalam arahan ialah masalahnya.
Adakah mendakan menjejaskan pembacaan plat agar? Ia menjadikan plat kabur, mengurangkan kontras koloni semasa mengira, dan boleh mengaburkan tindak balas warna pada media selektif. Sediakan semua media plat dalam air tulen dan sediakan semula mana-mana yang termendak.
Apakah kualiti air yang diperlukan? Air ternyahion atau air suling dengan kekonduksian di bawah 10 µS/cm sudah memadai untuk penyediaan media; air ultratulen tidak diperlukan. Kebanyakan kaedah ujian kebangsaan menetapkan "air suling atau air dengan ketulenan setara".