الجواب المختصر
الراسب الأبيض أو الحليبي هو في الغالب فوسفات المغنيسيوم أو الكالسيوم: تنخفض ذائبية الفوسفات مع أيونات المغنيسيوم والكالسيوم في درجات الحرارة العالية فتتكوّن بلورات. يختلف هذا عن الراسب الأسود، وهو كبريتيد الحديد المتكوّن من تفاعل كبريتيد الهيدروجين المنطلق من الأحماض الأمينية الكبريتية مع الحديد؛ انظر راسب أسود في مرق التخمير بعد التعقيم. الراسب الأبيض ليس ساماً في ذاته، لكنه يعني أن جزءاً من الفوسفور والمغنيسيوم والكالسيوم خرج من المحلول، وهو ما يؤثر في النمو في الأوساط محددة التركيب وأوساط التخمير. ولا ينبغي أن يظهر راسب في وسط اختبار قياسي محضَّر بشكل صحيح؛ وإذا ظهر، فافحص الماء أولاً.
التفريق بين الرواسب
| المظهر | الأرجح | المنشأ |
|---|---|---|
| مسحوق أبيض ناعم، يتعلّق عند الرج ويستقر عند الترك | فوسفات المغنيسيوم أو الكالسيوم | التقاء الفوسفات بالمغنيسيوم أو الكالسيوم |
| ندف بيضاء ملتصقة بالزجاج | بروتين متغيّر الطبيعة | فرط تسخين البيبتون أو pH بعيد جداً |
| رمادي إلى أسود | كبريتيد الحديد | أحماض أمينية كبريتية مع الحديد |
| بني، والزجاجة كلها أغمق | نواتج ميلارد | فرط تسخين السكر والأحماض الأمينية |
اختبار بسيط: يذوب راسب الفوسفات الأبيض عند إضافة بضع قطرات من حمض الهيدروكلوريك المخفف؛ ولا تذوب ندف البروتين.
التركيبات المعرّضة له
- فوسفات عالٍ مع المغنيسيوم والكالسيوم: الأوساط محددة التركيب من نوع M9، وأوساط التخمير التي تجمع فوسفات البوتاسيوم الثنائي وكبريتات المغنيسيوم وكلوريد الكالسيوم.
- التحضير بماء الصنبور: يتفاعل العسر (الكالسيوم والمغنيسيوم) في ماء الصنبور مع الفوسفات في التركيبة. هذا هو السبب الأكثر شيوعاً في مختبرات الاختبار؛ والمسحوق نفسه المحضَّر بماء منقّى يكون سليماً.
- pH قلوي: يترسب الفوسفات مع المغنيسيوم والكالسيوم بسهولة أكبر فوق pH 7.5.
- المركّزات: مركّز 10x يُعقَّم لتوفير المساحة يترسب أكثر لأن كل شيء فيه مركّز عشر مرات.
كيف تتجنبه
- حضّر بماء منقّى أو منزوع الأيونات. هذا وحده يزيل معظم الحالات المعملية.
- عقّم على حدة: حضّر أملاح المغنيسيوم والكالسيوم كمحلول مركّز منفصل، وعقّمه، وأضفه بشكل عقيم بعد أن يبرد الوسط إلى ما دون 50 °C. أبقِ الفوسفات في التركيبة الرئيسية. هذه ممارسة معتادة لأوساط التخمير.
- أضف عاملاً مخلبياً: عشرات المليغرامات في اللتر من سترات الصوديوم أو EDTA تمسك المغنيسيوم والكالسيوم وتمنعهما من التبلور مع الفوسفات. فعّال خاصة في محاليل العناصر النزرة.
- لا تترك pH قبل التعقيم قلوياً: اضبط على الهدف وعقّم؛ لا ترفعه «قليلاً مراعاةً للانخفاض».
- لا تفرط في التركيز: التركيبات التي تجمع الفوسفات مع المغنيسيوم أو الكالسيوم ينبغي تقسيمها متى تجاوز معامل التركيز نحو 5x.
هل يمكن استخدام وسط فيه راسب؟
- أوساط الاختبار القياسية (TSA وPCA وMacConkey وما شابهها): عند تحضيرها بماء منقّى وفق التعليمات، لا ينبغي أن يظهر راسب. وإذا ظهر، فأعد التحضير وافحص الماء والوزن؛ فقد تكون الاستجابة الزرعية خارج المواصفة أصلاً.
- أوساط التخمير: يمكن استخدام كمية صغيرة من الراسب الأبيض بعد رجّها، مع إدراك أن بعض الفوسفور والمغنيسيوم لم يعد في المحلول. وإذا تفاوتت الكمية من تحضيرة إلى أخرى، فسيتفاوت الأداء كذلك؛ انتقل إلى التعقيم المنفصل.
- الأوساط محددة التركيب: غير موصى به. كل مكوّن محسوب، وكل ما يترسب يؤثر مباشرة في النمو.
الأسئلة الشائعة
كان الوسط صافياً في الأوتوكلاف وابيضّ أثناء التبريد. لماذا؟ تتغير ذائبية فوسفات الكالسيوم والمغنيسيوم مع درجة الحرارة ويتبلور بعضها عند التبريد. والعلاج نفسه: ماء منقّى، أو تعقيم منفصل، أو عامل مخلبي.
تقول تعليمات وسط مجفف «راسب خفيف بعد التسخين أمر طبيعي». ما هذا؟ بعض التركيبات التي تحتوي على الفوسفات والمغنيسيوم (بعض أوساط بكتيريا حمض اللاكتيك والخميرة مثلاً) ذات عتامة خفيفة بالتصميم وتذكر التعليمات ذلك؛ حرّك دوائرياً ووزّع. أما الراسب غير المذكور في التعليمات فهو المشكلة.
هل يؤثر الراسب في قراءة أطباق الآجار؟ يجعل الأطباق ضبابية، ويقلل تباين المستعمرات عند العد، وقد يحجب التفاعلات اللونية في الأوساط الانتقائية. حضّر كل أوساط الأطباق بماء منقّى وأعد تحضير أي وسط يترسب.
ما جودة الماء المطلوبة؟ يكفي ماء منزوع الأيونات أو مقطر بموصلية أقل من 10 µS/cm لتحضير الأوساط؛ ولا يلزم ماء فائق النقاء. تحدد معظم طرق الاختبار الوطنية «ماء مقطر أو ماء بنقاء مكافئ».